NIT-1細(xì)胞的培養(yǎng)方法

一.細(xì)胞簡(jiǎn)介：
細(xì)胞名稱：nit-1/小鼠胰島素瘤β細(xì)胞
智立編碼：20211259101371674
組織來(lái)源胰腺/朗格漢斯胰島
生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣
生物安全等級(jí)2
生長(zhǎng)培養(yǎng)基ham'sf-12k＋10%fbs＋1%p/s
傳代比例1:2-1:3
換液頻率2~3次/周
凍存條件
凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%fbs+5%dmso
溫度：液氮
二.　培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；co2，5%
溫度：37℃
保藏機(jī)構(gòu)atcc;crl-2055
培養(yǎng)條件：37℃，5%co2，90%rpmi-1640+10%fbs。
三.　復(fù)蘇步驟：
1.新制100mm平皿1個(gè)，含12ml上述培養(yǎng)液；
2.凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴1~2min,待完全溶解后盡快移入安全柜復(fù)蘇；
3.用無(wú)菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時(shí)針搖勻；
4.放入（37℃，5%co2）培養(yǎng)箱中，過(guò)夜換液，2-4天長(zhǎng)滿。
傳代/凍存：將舊培養(yǎng)液吸除，pbs清洗兩遍后，加入2ml（/100mm皿/t25瓶）胰酶（0.25%trypsin+0.02%edta），在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，吸除大部分胰酶，留約0.5ml，移至培養(yǎng)箱消化，約1min取出。
1.傳代：6ml培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可1:3傳代；
2.凍存：3ml凍存液（50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%fbs+10%dmso）終止消化，吹打均勻，分為3支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。
四.　注意事項(xiàng)：
1.收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請(qǐng)?jiān)?4小時(shí)內(nèi)及時(shí)聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好；
2.凍存管形式，收貨后及時(shí)置于-80℃冰箱保存，若長(zhǎng)時(shí)間不使用，應(yīng)過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮保藏；
3.t25形式，收貨后先培養(yǎng)瓶原裝置于培養(yǎng)箱靜養(yǎng)4h，然后再對(duì)細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)操作。
4.復(fù)蘇時(shí)每管一次用完不得留存，復(fù)蘇后傳一代，即可正常使用。請(qǐng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補(bǔ)發(fā)服務(wù)。